技術(shù)文章
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技術(shù)文章
2023-109
根據(jù)試劑的來源和標本的性狀及檢測的具備條件的不同,所使用的檢測方法也不同,那么ELISA檢測方法有哪些呢?讓我們一起來看看吧!一、雙抗體夾心法測抗原雙抗體夾心法是將特異性抗體結(jié)合到固相載體上形成固相抗體,然后和待測血清中的響應抗原結(jié)合形成免疫復合物,洗滌后加酶標記抗體,與免疫復合物中的抗原結(jié)合形成酶標抗體-抗原-固相抗體復合物,加底物顯色,判斷抗原的含量。二、競爭法首先將特異性抗體包被于固相載體表面,經(jīng)洗滌后分成兩組:一組加酶標記抗原和被測抗原的混合液,另一組只加酶標記抗原,...
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2023-109
基于NGS測序的諸多優(yōu)點,故此技術(shù)在全球測序市場上占有著絕對的優(yōu)勢位置,而新一代測序(NGS)文庫制備是一體化測序流程中的一個關(guān)鍵因素,那么什么是文庫構(gòu)建呢?讓我們一起來看看吧!基因文庫是儲存了某種生物的DNA片段的受體菌的集合體。文庫分為儲存全部DNA片段和部分DNA片段,前者叫基因組文庫,后者包括cDNA文庫。文庫構(gòu)建的基礎是將目標RNA或DNA制備成可以和測序儀器兼容的形式。從組織或者細胞中將DNA或RNA提取出來,并通過機械破碎或者是酶切法對其進行片段化。如果前面提取...
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2023-108
你知道不同動物細胞或組織的蛋白質(zhì)抽提步驟是怎樣的嗎?讓我們一起來看看吧!一、培養(yǎng)的貼壁動物細胞的蛋白質(zhì)抽提步驟1.從貼壁細胞培養(yǎng)瓶中小心傾去培養(yǎng)液。2.預冷的PBS清洗貼壁的細胞2次,小心傾去PBS。3.配置含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑(1ml抽提試劑中加入5μl蛋白酶抑制劑混合液,5μlPMSF和5μl磷酸酶混合液)。4.細胞瓶中加入預冷的含抑制劑的蛋白質(zhì)抽提試劑(107個細胞中加入1ml抽提試劑;5×106個細胞中加入0.5ml抽提試劑),輕輕搖動5分鐘。5.用一預冷的橡膠和...
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2023-108
質(zhì)粒構(gòu)建是指選定的目的外源基因(DNA)先要經(jīng)過PCR擴增。隨后用限制性內(nèi)切酶分別切割載體和外源DNA片段,再使用DNA連接酶將切割后的載體與DNA片段連接,轉(zhuǎn)入宿主細胞。最后經(jīng)過篩選鑒定出正確的重組克隆質(zhì)粒,實現(xiàn)目的基因在宿主細胞內(nèi)的正確表達。那么質(zhì)粒構(gòu)建實驗影響因素有哪些呢?讓我們一起來看看吧!一、載體的選擇在選擇克隆載體時應注意以下幾點:①具有自主復制能力,拷貝數(shù)高;②攜帶易于篩選的選擇標記;③含有多種限制酶的單一識別序列,以供外源基因插入;④載體應盡可能小(<15kb...
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2023-108
熒光原位雜交是一門新興的分子細胞遺傳學技術(shù),是20世紀80年代末期在原有的放射性原位雜交技術(shù)的基礎上發(fā)展起來的一種非放射性原位雜交技術(shù)。那么影響熒光原位雜交實驗的因素有哪些呢?讓我們一起來看看吧!一、固定液的選擇及固定時間①石蠟組織建議用10%中性緩沖福爾馬林固定12~48h,其它固定液對實驗結(jié)果可能產(chǎn)生一定的影響。②組織標本離體后應盡快固定,較大標本切開固定。如樣本固定不及時,熒光信號會減弱。(尤其環(huán)境溫度較高時更應及時固定)③固定液體積應不少于標本體積的10倍,否則固定不...
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